Hai bisogno di produrre una specifica proteina, ma non disponi di un protocollo di espressione e purificazione? Ti aiutiamo noi.
Cosa facciamo?
Progettiamo una strategia di clonaggio a partire dalla sequenza proteica fornita dal cliente in vettori di espressione idonei per E. coli, utilizzando un sistema di espressione T7 e prevedendo diverse tag di affinità e solubilità (es. His-tag, SUMO-tag, ZZ-tag, GB1-tag, Strep-tag).
Eseguiremo quindi un test di espressione in diversi ceppi di E.coli e valuteremo la capacità di esprimere la proteina ricombinante mediante SDS-PAGE. Dopo l’espressione della proteina faremo un test di screening per la solubilità e la identificheremo tramite spettrometria di massa.
Se la proteina sarà espressa in forma solubile e in quantità significative, si procederà con un test di fattibilità per la purificazione in scala dimostrativa. La purezza e la stima della resa proteica a questo stadio verranno determinate tramite analisi SDS-PAGE e misurazioni dell’assorbanza a 280 nm o test di Bradford.
Proteine per le quali non sia stato ancora sviluppato un protocollo di purificazione, possono risultare difficili da esprimere e purificare in E. coli. Sarà eventualmente discussa con il cliente la possibilità di effettuare ulteriori tentativi utilizzando differenti tag e condizioni di coltura per aumentare la solubilità, e/o la possibilità di purificazione a partire da corpi di inclusione. Offriamo inoltre la possibilità di una produzione a più fasi, che consente di valutare i risultati passo dopo passo, nonché la probabilità di successo delle fasi successive.
Cosa riceverai?
Ci aspettiamo di determinare la fattibilità della produzione e purificazione della proteina in E. coli per i tuoi target. Le proteine saranno in soluzione. Verrà prodotto un report descrivendo tutti i test di espressione effettuati e le condizioni utilizzate per ottenere campioni solubili.