Espressione eterologa di proteine ricombinanti in E. coli (con protocollo da determinare)

Hai bisogno di produrre una specifica proteina, ma non disponi di un protocollo di espressione e purificazione? Ti aiutiamo noi.

Cosa facciamo?

Progettiamo una strategia di clonaggio a partire dalla sequenza proteica fornita dal cliente in vettori di espressione idonei per E. coli, utilizzando un sistema di espressione T7 e prevedendo diverse tag di affinità e solubilità (es. His-tag, SUMO-tag, ZZ-tag, GB1-tag, Strep-tag).

Eseguiremo quindi un test di espressione in diversi ceppi di E.coli e valuteremo la capacità di esprimere la proteina ricombinante mediante SDS-PAGE. Dopo l’espressione della proteina faremo un test di screening per la solubilità e la identificheremo tramite spettrometria di massa.

Se la proteina sarà espressa in forma solubile e in quantità significative, si procederà con un test di fattibilità per la purificazione in scala dimostrativa. La purezza e la stima della resa proteica a questo stadio verranno determinate tramite analisi SDS-PAGE e misurazioni dell’assorbanza a 280 nm o test di Bradford.

Proteine per le quali non sia stato ancora sviluppato un protocollo di purificazione, possono risultare difficili da esprimere e purificare in E. coli.  Sarà eventualmente discussa con il cliente la possibilità di effettuare ulteriori tentativi utilizzando differenti tag e condizioni di coltura per aumentare la solubilità, e/o la possibilità di purificazione a partire da corpi di inclusione. Offriamo inoltre la possibilità di una produzione a più fasi, che consente di valutare i risultati passo dopo passo, nonché la probabilità di successo delle fasi successive.

Cosa riceverai?

Ci aspettiamo di determinare la fattibilità della produzione e purificazione della proteina in E. coli per i tuoi target. Le proteine saranno in soluzione.  Verrà prodotto un report descrivendo tutti i test di espressione effettuati e le condizioni utilizzate per ottenere campioni solubili.

 

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Tariffe

Studio di fattibilità di espressione eterologa

Utente unibo: €  5000 (per campioni multipli, aggiungere 1000 euro per campione)

Utente esterno: €  10000 (per campioni multipli, aggiungere 2000 euro per campione)

Comprende: a) il disegno di un strategia di cloning, b) il test di espressione proteica, c) il test di solubilità, c) il test di fattibilità per la purificazione.

Produzione delle proteine eterologhe 

Utente unibo: €  5000 

Utente esterno: €  10000 

Comprende: a) lo studio pilota per espressione e purificazione, b) il controllo di purezza e stabilità della proteina purificata, c) lo scale up della produzione della proteina (1-10 mg, purezza >90%).